Государственный стандарт Союза ССР ГОСТ 10846-91 "Зерно и продукты его переработки. Метод определения белка" (утв. постановлением Комитета стандартизации и метрологии СССР от 18 декабря 1991 г. N 1995) стр. 2

3.1.3. Одновременно со взятием навесок для анализа берут навески для определения влажности: зерна - по ГОСТ 13856.5, крупы - по ГОСТ 26312.7, муки и отрубей - по ГОСТ 9404.

3.2. Подготовка реактивов и растворов

3.2.1. Для приготовления катализатора 1 взвешивают 10,0 г сернокислой меди, 100,0 г сернокислого калия и 2,0 г селена, помещают навеску в ступку и смесь тщательно растирают до получения однородного мелкозернистого порошка.

Для приготовления катализатора 2 взвешивают 10,0 г сернокислой меди и 300,0 г сернокислого калия, помещают навески в ступку и смесь тщательно растирают до получения однородного мелкозернистого порошка.

3.2.2. Для приготовления раствора индикатора взвешивают 0,2 г метилового красного и 0,1 г бромкрезолового зеленого; растворяют навески в 96%-ного этилового спирта.

3.2.3. Для приготовления раствора серной кислоты используют концентрированную кислоту - по ГОСТ 25791 и титр серной кислоты - в соответствии со стандартами и правилами, приложенными к комплекту.

3.2.4. Для приготовления раствора гидроокиси натрия используют натрия гидроокись - по ГОСТ 4328 и титр натрия гидроокиси - в соответствии со стандартами и правилами, приложенными к комплекту.

3.2.5. Для приготовления раствора борной кислоты массовой концентрацией взвешивают 40 г борной кислоты, растворяют навеску в небольшом количестве воды при нагревании, а затем раствор переносят в мерную колбу на , объем которой после охлаждения раствора доводят до метки дистиллированной водой.

4. Проведение определения

4.1. Разрушение органического вещества

4.1.1. В колбу Кьельдаля с навеской добавляют 1,5 - 2,0 г катализатора 1 или 2 и осторожно вливают концентрированной серной кислоты. Содержимое перемешивают покачиванием колбы, добиваясь полного смачивания навески.

Допускается в колбу Кьельдаля с навеской вместо катализатора 1 или 2 добавлять раствора перекиси водорода объемной долей 30% и после прекращения бурной реакции приливать концентрированной серной кислоты.

4.1.2. Нагревание колбы проводят в вытяжном шкафу или помещении с принудительной вентиляцией.

В горлышко колбы Кьельдаля вставляют маленькую стеклянную воронку или втулку для уменьшения улетучивания паров кислоты во время нагревания.

Колбу устанавливают на электроплитке или укрепляют в штативе над газовой горелкой так, чтобы ее ось была под углом 30 - 45°.

Начальное нагревание колбы проводят под наблюдением при слабом накале электроплитки или на слабом пламени газовой горелки медленно, ввиду возможного образования пены, которая может подняться в горлышко колбы или даже перелиться через край.

4.1.3. После прекращения образования пены усиливают нагревание колбы и доводят содержимое ее до кипения. Дальнейшая интенсивность кипения раствора в колбе должна быть такой, чтобы пары кислоты конденсировались в средней части горлышка колбы Кьельдаля.

Во время нагревания колбы следят за тем, чтобы на стенках колбы не оставалось черных несгоревших частиц продукта. Если их обнаруживают, то смывают небольшим количеством серной кислоты, которую добавляют в колбу, или легким встряхиванием содержимого колбы.

4.1.4. Раствор в колбе кипятят до тех пор, пока он не станет прозрачным (допускается слегка зеленоватый оттенок). Затем проводят дополнительное нагревание колбы еще в течение 30 мин, после чего сжигание заканчивают.

4.1.5. Колбу охлаждают и к ее содержимому постепенно приливают дистиллированной воды, слегка взбалтывая раствор. Полученный раствор снова охлаждают.

4.2. Отгонка аммиака

4.2.1. В бачок-парообразователь 1 (см. приложение) через воронку 2 наливают дистиллированную воду, заполняя ею более половины объема бачка. Открывают кран 3 и зажим 4.

Нагревают бачок с водой на электрической плитке или газовой горелке. Присоединяют пустую колбу Кьельдаля 10 к каплеуловителю 7 и воронке для щелочи 5.

После того как вода в бачке закипит, закрывают кран 3. Включают холодильник 8, подставляют под него пустую коническую колбу 9 и в течение 5 - 10 мин "пропаривают" прибор.

По истечении указанного времени открывают краны 3 и 6, а зажим 4 закрывают.

4.2.2. В коническую колбу вместимостью приливают при помощи бюретки или пипетки раствора борной кислоты массовой концентрацией или же раствора серной кислоты и добавляют 4 - 5 капель индикатора. Вынимают пустую коническую колбу из-под холодильника и вместо нее подставляют коническую колбу с раствором борной или серной кислоты.

Колбу подставляют под холодильник так, чтобы кончик холодильника был погружен в раствор на глубину не менее 1 см.

Вынимают пустую колбу Кьельдаля и вместо нее подставляют колбу Кьельдаля с растворами.

4.2.3. Закрывают кран 6 и наливают в воронку раствора щелочи массовой концентрацией . Затем осторожно открывают кран 6 и понемногу при слабом покачивании колбы Кьельдаля приливают щелочь к содержимому колбы.

При этом наблюдается изменение цвета раствора в колбе Кьельдаля: из прозрачного он становится синим или бурым.

4.2.4. Открывают зажим 4, закрывают краны 3 и 6 и начинают отгонку аммиака, который перегоняемый паром из колбы Кьельдаля конденсируется в холодильнике и попадает в приемную коническую колбу с раствором борной или серной кислоты.

Через 10 мин коническую колбу с раствором кислоты опускают, при этом кончик холодильника не должен касаться жидкости.

Конец отгонки устанавливают при помощи лакмусовой бумажки. Для этого кончик холодильника обмывают небольшим количеством дистиллированной воды, отставляют коническую колбу из-под холодильника и под стекающие из холодильника капли конденсата подставляют лакмусовую бумажку. В случаях, когда лакмусовая бумажка не синеет, отгонку аммиака заканчивают. Если лакмусовая бумажка синеет, то приемную колбу снова подставляют под холодильник и продолжают отгонку.

4.2.5. После окончания отгоняя закрывают зажим 4 и открывают краны 3 и 6.

Обмывают кончик холодильника над конической колбой дистиллированной водой и коническую колбу убирают. Колбу Кьельдаля заменяют на пустую и "пропаривают" всю систему для удаления возможных остаточных количеств аммиака.

4.2.6. Допускается, при применении для сжигания навесок колб Кьельдаля вместимостью проводить отгонку аммиака без бачка-парообразователя непосредственным нагревом колбы Кьельдаля на электронагревателе. Содержимое колбы Кьельдаля перед отгонкой аммиака разбавляют дистиллированной воды и дальнейшие операции отгонки выполняют так, как указано в пп. 4.2.2 - 4.2.5.

4.3. Титрование

4.3.1. При отгонке аммиака в раствор борной кислоты, аммиак, содержащийся в приемной конической колбе, оттитровывают раствором серной кислоты до перехода окраски индикатора из зеленой в розовую.

4.3.2. При отгонке аммиака в раствор серной кислоты, содержимое конической колбы (избыток раствора серной кислоты) титруют раствором гидроокиси натрия до перехода окраски в зеленую.

4.4. Определение азота в реактивах и воде

4.4.1. Одновременно с определением азота в зерне и продуктах его переработки проводят анализ на выявление загрязнения воды и реактивов азотом (холостое определение). Для этого проводят весь анализ в соответствии с требованиями разд. 4, за исключением взятия навески.

4.4.2. Если для взятия навески использовался обеззоленный фильтр, то аналогичный фильтр также должен быть использован в анализе на выявление загрязнения реактивов и воды азотом.

4.4.3. Определение азота в реактивах проводят каждый раз после замены партий реактивов.

5. Обработка результатов

5.1. При отгонке аммиака в раствор борной кислоты содержание азота ( ) в зерне или продуктах его переработки при фактической влажности в процентах вычисляют по формуле

215 × 53 пикс.     Открыть в новом окне

,

где m - масса навески, г;

- объем раствора серной кислоты, пошедшей на титрование аммиака в растворе, ;

К - поправка к титру раствора серной кислоты (при приготовлении раствора из концентрированной серной кислоты);

0,0014 - количество азота, эквивалентное раствора серной кислоты, г;