А.8 Агар трехсахарный железистый (TSI агар), или агар Клиглера, или агар Олькеницкого
А.8.1 Состав TSI агара
Экстракт мясной, г | 3,0 |
Экстракт дрожжевой, г | 3,0 |
Пептон, г | 20,0 |
Натрий хлористый, г | 5,0 |
Лактоза, г | 10,0 |
Сахароза, г | 10,0 |
Глюкоза, г | 1,0 |
Железа III цитрат, г | 0,3 |
Натрия тиосульфат, г | 0,3 |
Феноловый красный, г (или 6 раствора, приготовленного по А.3.1.2, если среду готовят из отдельных компонентов) | |
0,024 | |
Агар, г (зависит от желирующих свойств) | 9,0-18,0 |
Вода, | 1000 |
При нагревании растворяют дегидратированные компоненты или дегидратированную основу среды в воде. Устанавливают рН так, чтобы после стерилизации он составлял (7,4 + 0,2) при температуре 25°С. Переносят по 7-8 среды в пробирки. Стерилизуют в автоклаве при температуре (121 1)°С в течение 15 мин. После стерилизации оставляют в наклонном положении так, чтобы получился столбик среды высотой, равной приблизительно двум диаметрам пробирки (2-2,5 см), а над ним - скошенная поверхность длиной около 5 см.
Допускается использование агара Клиглера или среды Олькеницкого. Среды готовят в соответствии с рекомендациями, указанными на этикетке.
А.9 Агар с мочевиной (агар Кристенсена)
А.9.1 Основа среды
А.9.1.1 Состав
Пептон, г | 1,0 |
Глюкоза, г | 1,0 |
Натрий хлористый, г | 5,0 |
Калий фосфорнокислый однозамещенный, г | 2,0 |
Феноловый красный, г (или 3 раствора, приготовленного по А.3.1.2, если среду готовят из отдельных компонентов) | |
0,012 | |
Агар, г (зависит от желирующих свойств) | 9,0-18,0 |
Вода, | 1000 |
А.9.1.2 Приготовление
При нагревании растворяют дегидратированные компоненты или дегидратированную основу в воде. Устанавливают рН так, чтобы после стерилизации он составлял (6,8 0,2) при температуре 25°С. Основу среды равномерно разливают в колбы или флаконы и стерилизуют в автоклаве при температуре (121 1)°С в течение 15 мин.
А.9.2 Раствор мочевины
А.9.2.1 Состав
Мочевина, г | 40,0 |
Вода, , не более | 100 |
А.9.2.2 Приготовление
Мочевину помещают в колбу вместимостью 100 , растворяют в воде, объем раствора доводят водой до метки. Раствор мочевины стерилизуют методом мембранной фильтрации по ГОСТ 26670 через фильтры с размером диаметра пор 0,22 мкм, или текучим паром в течение 30 мин.
А.9.3 Раствор фенолового красного
А.9.3.1 Состав и приготовление - по А.3.1.2
А.9.4 Среда готовая
А.9.4.1 Состав
Основа (А.9.1), | 950 |
Раствор мочевины (А.9.2), | 50 |
А.9.4.2 Приготовление
Прибавляют с соблюдением правил асептики раствор мочевины к основе, предварительно расплавленной и охлажденной до температуры 44-47°С. Разливают готовую среду в стерильные пробирки по 7-8 . После этого среду скашивают так, чтобы получились скошенная поверхность и столбик среды высотой, равной приблизительно двум диаметрам пробирки - 2-2,5 см (А.9.2).
А.10 Среда для определения L-лизин декарбоксилазы
А.10.1 Состав
L-лизин моногидрохлорид, г | 5,0 |
Экстракт дрожжевой, г | 3,0 |
Глюкоза, г | 1,0 |
Бромкрезоловый пурпуровый, г (или 5 раствора, приготовленного по А.10.3) | 0,015 |
Вода, | 1000 |
А.10.2 Приготовление
При нагревании растворяют дегидратированные компоненты или дегидратированную основу в воде. Устанавливают рН так, чтобы после стерилизации он составлял (6,8 0,2) при температуре 25°С. Разливают среду по 2-5 в стерильные пробирки. Стерилизуют в автоклаве при температуре (121 1)°С в течение 15 мин.
А.10.3 Раствор бромкрезолового пурпурного
А.10.3.1 Состав
Бромкрезоловый пурпурный, г | 0,3 |
Вода, | 100 |
А.10.3.2 Приготовление
Бромкрезоловый пурпурный переносят в фарфоровую ступку и постепенно растворяют в воде. Раствор переливают в мерную колбу вместимостью 100 и доводят водой до метки.
Раствор хранят в закрытом сосуде из темного стекла при комнатной температуре не более 3 мес.
А.11 Среда для Фогес-Проскауера (VP) реакции
А.11.1 Состав
Пептон, г | 7,0 |
Глюкоза, г | 5,0 |
Калий двузамещенный фосфорнокислый, г | 5,0 |
Вода, | 1000 |
А.11.2 Приготовление
При нагревании растворяют дегидратированные компоненты или дегидратированную основу в воде. Устанавливают рН так, чтобы после стерилизации он составлял (6,9 0,2) при температуре 25°С. По 3 среды разливают в пробирки. Стерилизуют в автоклаве при температуре (121 1)°С в течение 15 мин.
А.12 Реактив для Фогес-Проскауера (VP) реакции
А.12.1 Раствор креатина (N-амидиносаркозин)
А.12.1.1 Состав
Креатина моногидрат, г | 0,5 |
Вода, | 100 |
А.12.1.2 Приготовление
Растворяют креатина моногидрат в воде.
А.12.2 1-нафтол, спиртовой раствор
А.12.2.1 Состав
1-нафтол, г | 6 |
Этиловый спирт 96%-ный (по объему), | 100 |
А.12.2.2 Приготовление
Растворяют 1-нафтол в 96%-ном этиловом спирте.